食用菌接种用洁净需多少级标准

‘壹’ 食用菌各个车间的净化级别是多少

如果是 平菇那么，无需担心污染。 如果是别的蘑菇，那么，培养料要高温灭菌，接种室，接种台要完全灭菌。用紫外线杀30分钟，差不多百级了。

‘贰’ 洁净室等级标准是什么

中国2010版GMP规定：
1）洁净区的设计必须符合相应的“静态”标准，以达到“动态”的洁净要求。“静态”是指安装已经完成并已运行，但没有操作人员在场的状态。而“动态”是指生产设施按预定工艺模式运行并有规定数量的操作人员现场操作的状态.
2）生产操作全部结束，操作人员撤离生产现场并经15～20 min（指导值）自净后，洁净区应达到表中的“静态”标准。药品或敞开容器直接暴露环境微粒动态测试结果应达到表中A级的标准。
3）无菌操作的隔离操作器所处环境的级别至少应为D级。
4）为了确定A级区的级别，每个采样点的采样量不得少于1m3。A级区空气尘埃粒子的级别为ISO 4.8，以≥0.5μm的尘粒为限度标准。B级区（静态）的空气尘埃粒子的级别为ISO 5，同时包括表中两种粒径的尘粒。对于C级区（静态和动态）而言，空气尘埃粒子的级别分别为ISO 7和ISO 8。对于D级区（静态）空气尘埃粒子的级别为ISO 8。测试方法可参照ISO14644-1。
5）在确认级别时，应使用采样管较短的便携式尘埃粒子计数器，以避免在远程采样系统长的采样管中≥5.0μm尘粒的沉降。在单向流系统中，应采用等动力学的取样头。
6）可在常规操作、培养基模拟灌装过程中进行测试，证明达到了动态的级别，但培养基模拟试验要求在“最差状况”下进行动态测试。

‘叁’ 微生物限度洁净度1000级和100级是如何规定的

人和净化指出，微生物限度即微生物限度检查法，系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检查过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。
检查结果一1g、1ml、10g、10ml或10㎡为单位报告。有疑问可询安徽人和净化。

‘肆’ 如何提高鸡枞菌等食用菌接种率

食用菌具有味美可口、品种繁多、营养和健康功能突出等特点。鸡枞是食用菌中的一种，因肥硕壮实、质细丝白、清香可口，可与鸡肉相媲美，且生长到一定时候，会散开象鸡的羽毛，所以叫鸡枞菌。

为满足日益增长的市场需求，可采用规模化和标准化方式种植鸡枞菌。采用规模化方式栽培鸡枞菌，既可扩大鸡枞菌的产量，又可提高食用菌种植者的收益。在鸡枞菌的接种环节，如卫生条件控制不好的话，则杂菌将污染鸡枞菌菌种，会严重影响鸡枞菌的产量和质量。

从事食用菌消毒技术开发的上海康久消毒技术中心的科研人员周立法先生认为，采用先进的NICOLER动态消毒技术，可预防接种环节遭受杂菌的污染，能有效提高鸡枞菌等食用菌的接种率、促进食用菌产业稳步发展。

鸡枞菌是丛生性菌类，数朵相连着，称作窝鸡枞，偶尔散生者为散鸡枞。有时数十朵至数百朵相连，又名火把鸡枞或斗篷鸡枞。其中，质量最好的是蒜头鸡枞，次为开鸡枞，再次为火把鸡枞。

鸡枞菌肉细嫩，气味浓香，味道鲜美，畅销于国内外市场。根据颜色和形态特点，鸡枞菌可分为黑皮、白皮、黄皮、花皮等许多类型。味道以黑皮（青皮）鸡枞最好。此外，还有鸡枞花等真菌的子实体，味道同鸡枞一样鲜美。

鸡枞菌不仅口味鲜美，还具有好的营养健康价值：1.鸡枞菌可提高人体免疫力、抑制癌细胞生长、降低人体血糖含量。2.鸡枞菌有健脾和胃、增进食欲的功效。3.鸡枞菌含钙、磷、铁、蛋白质等多种营养成分，是体弱、病后和老年人理想的食疗佳品。4.鸡枞菌可养血、润燥。

据上海康久消毒技术中心的周立法先生分析，在接种环节，污染鸡枞菌菌种的杂菌很多，包括细菌、霉菌、酵母菌、放线菌等。鸡枞菌菌种遭受杂菌污染的原因主要包括：1.菌种培养室的卫生环境差，空气中含有很多微生物，污染了鸡枞菌菌种。2.培养基灭菌不彻底。3.接种室消毒不严，接种室内的杂菌数量较多。4.鸡枞菌菌种中含有杂菌。5.接种人员操作不当。

上海康久消毒技术中心的周立法先生认为，为提高鸡枞菌等食用菌生产过程中的接种率、推动食用菌产业顺利发展，必须消除接种环节的杂菌污染。要达此目标，食用菌设施化栽培企业应从多方面采取有效措施——

一要净化接种室的环境，消除杂菌的污染。接种室应远离污染源，使用前应严格做好环境消毒工作，对接种室的空气、屋顶、墙面、地面等部位都应进行严格的杀菌消毒。

二要选用无污染、菌丝长势强、菌龄适宜的优良菌种。

三要对培养基彻底灭菌，确定合适的灭菌压力和灭菌时间。

四要对接种过程中所使用的容器、工具、仪器等进行杀菌消毒。

五要规范操作，在鸡枞菌菌种制作的全过程中，都应严格遵守无菌操作规程。

在接种过程中，杂菌会与鸡枞菌菌种形成竞争关系，将抑制鸡枞菌菌种的生长繁殖，从而降低鸡枞菌的质量和产量。

为提高接种的成功率，鸡枞菌的接种操作需要卫生洁净的环境，必须对接种室的空气进行杀菌消毒，使之达到适宜接种的卫生程度。上海康久消毒技术中心开发的“双核臭氧杀菌技术”和“NICOLER动态消毒技术”，在改善空气卫生质量、提高鸡枞菌等食用菌接种率方面，具有十分重要的作用。

臭氧是一种高效杀菌剂，具有强烈的消毒灭菌作用，杀菌彻底迅速。在消毒灭菌的同时，臭氧可自行还原为氧气，不留任何痕迹，无二次污染，环保安全。但高浓度的臭氧对人体健康有害，所以，在有人工作的情况下，不可使用臭氧杀菌，以免危害人体健康。在下班后或中午休息时间，在无人的时候，可使用双核臭氧杀菌机，对鸡枞菌菌种接种室杀菌消毒。

在上班时间，在有人工作的情况下，则可使用动态消毒设备，对鸡枞菌等食用菌接种室杀菌消毒。NICOLER消毒技术是指人机可同场同步作业的一种消毒方式，在对室内空气杀菌消毒时，工作人员无需离开杀菌场所。该技术在对空气杀菌消毒的同时，对人体没有危害，此种消毒方式被称为动态消毒。

上海康久消毒技术中心采用NICOLER动态消毒技术，成功开发了“动态消毒设备”，该消毒设备采用最新的三级双向等离子体静电场工作原理，杀菌消毒过程为：通过高压直流脉冲，使等离子静电场产生逆电效应，生成大量的等离子体。在负压风机的作用下，空气中被微生物污染的空气被抽进消毒机内，通过等离子静电场时，带负电的细菌等微生物被分解击破，再组合药物浸渍型活性炭等组件，进行二次消毒过滤。经过处理的洁净空气大量快速循环流动，使食用菌、食品车间等受控环境保持在卫生洁净的状态。由于在对食用菌车间、食品车间杀菌消毒时，人可同时在车间内工作，所以，该种消毒设备被称作动态消毒设备。

NICOLER动态消毒设备不仅杀菌消毒效果良好，且使用方法也很简便，在工人上班时开机，在食用菌接种和食品生产过程中，不用关机，可持续不间断杀菌；在工人下班后，可同步关机。

据了解，应用动态消毒技术，对食用菌接种室进行空气消毒，在非洁净空间内，很容易达到30万级以下的空间洁净等级，能避免鸡枞菌等食用菌的菌种遭受不干净的空气的污染，可以提高接种成功率、促进鸡枞菌生产、推动食用菌产业健康发展。

‘伍’ 2010版中国GMP怎么规定洁净区的洁净级别 A,B,C,D标准是什么,

无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4个级别：
A级：高风险操作区,如灌装区、放置胶塞桶和与无菌制剂直接接触的敞口包装容器的区域及无菌装配或连接操作的区域,应当用单向流操作台（罩）维持该区的环境状态.单向流系统在其工作区域必须均匀送风,风速为0.36-0.54m/s（指导值）.应当有数据证明单向流的状态并经过验证.
在密闭的隔离操作器或手套箱内,可使用较低的风速.
B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级洁净区所处的背景区域.
C级和D级：指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区.
以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表：
洁净度级别 悬浮粒子最大允许数/立方米
静态 动态(3)
≥0.5μm ≥5.0μm(2) ≥0.5μm ≥5.0μm
A级(1) 3520 20 3520 20
B级 3520 29 352000 2900
C级 352000 2900 3520000 29000
D级 3520000 29000 不作规定 不作规定
注：
（1）为确认A级洁净区的级别,每个采样点的采样量不得少于1立方米.A级洁净区空气悬浮粒子的级别为ISO 4.8,以≥5.0μm的悬浮粒子为限度标准.B级洁净区（静态）的空气悬浮粒子的级别为ISO 5,同时包括表中两种粒径的悬浮粒子.对于C级洁净区（静态和动态）而言,空气悬浮粒子的级别分别为ISO 7和ISO 8.对于D级洁净区（静态）空气悬浮粒子的级别为ISO 8.测试方法可参照ISO14644-1.
（2）在确认级别时,应当使用采样管较短的便携式尘埃粒子计数器,避免≥5.0μm悬浮粒子在远程采样系统的长采样管中沉降.在单向流系统中,应当采用等动力学的取样头.
（3）动态测试可在常规操作、培养基模拟灌装过程中进行,证明达到动态的洁净度级别,但培养基模拟灌装试验要求在“最差状况”下进行动态测试.